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​獨家技術

​為每個問題提供專業解決方案

Easy 3D
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Easy 3D

超解析,超簡單

EASY 3D 模組的專利單一光路設計讓您可輕鬆獲得樣品特徵完整的三維結構。此外,EASY 3D 與任何低倍到高倍的物鏡兼容,可以校正 STED 光束中的像差,讓您以最佳方式完全自由地嵌入進行樣品成像。

EASY 3D

革命性的可編程SLM

成像的最佳幫手

EASY3D 設備使用可編程空間光調製器 (SLM) 來創建 2D 和 3D STED 顯微鏡所需的相位模式。同時,它還可用於校正 STED 光束的光學像差。

SLM 實現了革命性設計,僅使用一個 STED 光束而不是兩個單獨的 STED 光束,分別用於橫向 (XY) 和軸向 (Z) 解析度提昇。解析度提昇可以在純 XY 軸方向增強和主要 Z 軸方向增強之間進行調整。單光束設計淘汰了任何光束重組和校準,從而實現了出色的系統穩定性。

EASY 3D

光學像差控制,圖像更明亮

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EASY 3D

單一光路設計,校正永成過去

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EASY 3D 採用獨家單光束設計來承載 XYZ-STED。永遠完美對齊,無需校正。

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在傳統的 3D STED 設計中,一條光束承載 XY-STED,另一條承載 Z-STED。兩條光束可能會分開,導致訊號失準及分辨率的損失。

EASY 3D

水鏡、油鏡、甘油鏡,依使用需求任意搭配

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當使用油鏡對通過 13 μm 水進行測量時,會因為折射率不匹配,影像的螢光強度會顯著降低。導致無法形成清晰的圖像。

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EASY 3D 設計允許您在實驗中更換物鏡並在 STED 模式下使用最合適的鏡頭。此外,您可以使用我們的自適應光學設備進一步校正所有光束中的像差。

EASY 3D

​厚樣本、組織,從此不是問題

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Abberior 空間光調製器 (SLM)

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可達180µm的深層 3D STED 解析度


我們的可編程空間光調製器 (SLM) 的像差校正可使您在

樣品 180 µm 的深層獲得 3D STED 超解析成像!這只有在您根據樣本深度校正 Z-STED 零環形光束的情形下

才能實現。

EASY 3D

精細成像的最佳助手

  • 調整 XY 和 Z 的分辨率以適應您的成像問題

  • 可自由在水鏡、油鏡、甘油鏡中來回切換

  • 3D 解析度:至少可達 90 × 90 × 90 nm,常見為 75 × 75 × 75 nm

  • 2D 解析度:優於 30 × 30 nm

  • 像差校正:即使在樣品深處(> 20 μm)也能保持 STED PSF 的形狀

  • 任何 Abberior FACILITY 以上系統均可配備 EASY3D 設備

Image of Nuclear pore complexes (NUP) and Tubulin
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Two-color EASY3D volume of a cleared adult rat kidney sample
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Two-color EASY3D RESCUE STED volume stack of a cleared adult rat kidney sample
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Tubulin Imaging
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Two-color EASY3D-STED image of Tubulin & Giantin
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Mouse inner ear hair cells imaged with super-resolution in all three dimensions using EASY3D
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3D super-resolution volume image of active zones at the Drosophila larval neuromuscular junction
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自適應照明技術

Service Name

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自適應照明技術

4%傳統光劑量
完美達成超解析

自適應照明技術可自動偵測現有觀察區域上明顯不存在結構的區域,並通過減少或關閉雷射照射,將樣品上的光劑量顯著降低多達兩個數量級。大大減少了光漂白的機率。

無論在共軛焦影像或超解析成像中,有無自適應照明技術會在影像上產生極大的差異。

自適應照明技術

​何謂自適應照明

自適應照明技術包含三種相關但不同的技術:RESCUE、DYMIN 和 MINFIELD。它們的共同點是,對於掃描過程中的每個像素,會根據樣品的底層結構動態調整激發光,而不是無止盡地使用相同的雷射功率。圖像的暗區或失焦區域幾乎沒有受到照射,而存在螢光標記且處於焦點位置的區域則以 100% 的訊號和分辨率進行成像。這意味著激光只對在具有最大螢光效率及效果的地方進行照射,而不在其他地方。

 

自適應照明大大減少了光漂白,並能夠對 3D 成像或幾十幀影像進行長期測量,而傳統的超解析技術早已漂白了樣品。

 

自適應照明是減少樣品光劑量的第一選擇。

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RESCUE

RESCUE

​解決活細胞成像所面臨的問題

對於掃描期間的每個像素,RESCUE(Reduction of State transition Cycles)會短暫探測是否有任何結構,如果沒有,則立即關閉照明。這種快速探測通常在共軛焦模式下完成,時間約為像素總停留時間的 10%(“共軛焦探測”)。只有在該探測步驟期間檢測到訊號時,照明和檢測才會在剩餘像素停留時間內繼續進行。

在一個典型的樣本中,假定 80% 的區域是暗區,RESCUE 可將樣本接受的 STED 光子數量減少 80%,接受的激發光子數量減少 70%,這其中不會有任何分辨率或訊號損失。進一步與DYMIN 相結合,並使用我們的 Pulsed Laser 而不是 Continuous-Wave Lasers,您可以將光劑量顯著降低至百分之幾。這對於活細胞與 3D 成像非常重要。

RESCUE

RESCUE 成像記錄極大化

當記錄一個體積(即一組堆疊的 2D 圖像)時,效果更加顯著,因為 STED 環形圈(受衍射限制)在 Z 軸方向的尺寸明顯大於單個圖像的厚度。因此,記錄一張圖像的同時,也代表著 STED 額外記錄了另外20張圖像。正因為如此,使用 RESCUE 獲得的增益在體積成像中可放大 20 倍。

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DYMIN

DYMIN 漸進式精密偵測

在 RESCUE 之後,DYMIN(動態最小值)進一步減少了用最大 STED 功率照射的樣品區域。這是通過在探測結構時同時使用激發光及少量 STED Laser,並以多步方式來實現。與 RESCUE 一樣,如果在第一步中未檢測到結構,則關閉照明。但如果存在結構,接下來將施加少量的 STED 功率以提高解析度,從而提高探測靈敏度。其關鍵在於,小的 STED 功率已能快速顯著的提高解析度,這意味著只需很少的額外照射,就可以獲得更多關於螢光結構精確位置的訊息。只有在連續提高 STED 功率以確認當前掃描具有樣品結構時,才應用全分辨率功率,否則,在剩餘的像素時間內將立即關閉光照。這種以增加分辨率的漸進式探測能減少總體光漂白達好幾個數量級。帶來的好處是訊號及光學解析度都有顯著提昇。 

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DYMIN 極大地擴展了成像可能性

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DYMIN 亦可支援長時間量測

DYMIN

DYMIN 成像實證

使用 EASY3D 和 DYMIN 對比傳統的 STED 顯微鏡記錄哺乳動物細胞核的 3D 堆棧圖。圖中顯示 XZ 切面和堆棧採集後的共軛焦圖像,可見 DYMIN 顯著地減少了漂白。請注意,DYMIN 使我們能夠以卓越的分辨率和訊號獲取完整的堆棧。圖中顯示的是在Vero細胞中用抗體標記的核孔複合物蛋白 (nup153)。

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有使用與未使用 DYMIN 的 3D Stacks

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在沒有使用和有使用 DYMIN 的情況下,使用共軛焦所拍攝的體積記錄。

DYMIN

波浪圈

DYMIN 成像實證

DYMIN 以非凡的信噪比非常清晰地分辨出血影蛋白環形結構。圖示為原代海馬神經元(體外培養 22 天)所顯示出沿遠端軸突中呈特徵性 ~192 nm 間隔週期分布的 βII 血影蛋白。使用染劑:Abberior STAR 635P,激發光:635 nm,STED:775 nm。樣品由 Elisa D'Este (MPIbpc) 提供。

MINFIELD

MINFIELD 無光子STED技術

MINFIELD 是另一種只在需要時才將光束投射於樣品的照明方式。 MINFIELD 完全避免 STED 環形圈對整個視野進行掃描,而是只使用低功率的 STED 環形圈中央孔洞來掃描螢光結構。這讓成像區域必須小於環形圈中的衍射限制孔,因此帶來了 STED 世界中無可比擬的分辨解析度。

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MINFIELD

2D MINFIELD

圖示為 MINFIELD 應用在人類免疫缺陷病毒 1 型 (HIV-1)。為共軛焦與 MINFIELD 圖像,視野大小為 160 nm。圖像來自於 J. Hanne 等人所拍攝。 “Stimulated Emission Depletion Nanoscopy Reveals Time-Course of Human Immunodeficiency Virus Proteolytic Maturation” ACS Nano 10, 8215-8222, 2016.

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下圖為 gp210 和網格蛋白的成像示例。2D MINFIELD 在 gp210 和網格蛋白上呈現,MINFIELD 大小均為 200 nm。 

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抽象的未來派背景

3D MINFIELD

3D MINFIELD 呈現在直式 DNA 奈米尺上,間距為 91 nm,XZ 視圖。視野大小為 180 nm x 300 nm 的共軛焦和 MINFIELD 圖像。

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MINFIELD

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